氯霉素快速检测试剂盒操作流程
首先将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
1.实验开始前,用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。
2.将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
3.加样反应:加标准品或样本50ml/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物50ml/孔,再加入50ml/孔的抗体工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡5秒混匀,25℃反应30分钟。
4.洗涤:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用工作洗涤液250ml/孔充分洗涤5次,每次间隔30秒,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
5.显色:每孔加入底物液A 50ml,再加底物液B 50ml,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟。
6.终止:每孔加入终止液50ml,轻轻振荡混匀,终止反应。
7.测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。
氯霉素快速检测试剂盒注意事项
1.室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温(25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2.在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3.在所有孵育过程中,用盖板膜封住微孔板,避免光线照射。
4.混合要均匀,洗板要*,在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性。
5.不要使用过了有效期的试剂盒,不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6.反应终止液有腐蚀性,避免接触皮肤。
7.显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位(A450nm< 0.5 )时,表示试剂可能变质。