ELISA试剂盒总是需要时刻保温，主要因为ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发作。以抗体包被的夹心法为例，参加板孔中的标本，其间的抗原并不是都有平等的和固相抗结合的时机，只需靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体触摸。这是一个逐步平衡的进程，因而需经分散才干到达反响的终点。
在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反响，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反响的完结需求有一定的温度和时刻，这一保温进程称为温育，有人称之为孵育，在试剂盒中似不恰当。
保温的方法除有的ELISA试剂盒仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将其置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为防止蒸腾，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此刻可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱，试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传热性杰出的资料如金属等，在盒底垫湿的纱布，终将ELISA板放在湿纱布上。
湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度，特别是在气温较低的时分更应如此。无论是水浴仍是湿盒温育，反响板均不宜叠放，以确保各板的温度都能敏捷平衡。室温温育的反响，操作时的室温应严厉限制在规则的范围内，规范室温温度是指20～25℃，但具体操作时可根据说明书的要求操控温育。
室温温育时，试剂盒只需平置于操作台上即可。应留意温育的温度和时刻应按规则力求准确。为确保这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板一起测定。
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