布鲁氏菌检测试剂盒利用实时荧光PCR原理,主要用于布鲁氏菌的定性筛查检测。针对布鲁氏菌基因设计特异性引物和分子信标探针,在待检样本中含有布鲁氏菌DNA的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应荧光信号进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。
布鲁氏菌检测试剂盒检验方法:
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀,置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。
6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。
7.洗涤,扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm测定各孔吸光值。
布鲁氏菌检测试剂盒正确使用注意:
1.准备过程,试剂操作准备的不当很可能影响酶联免疫吸附测定ELISA结果。
2.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
3.洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
4.一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
5.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。
6.如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定。