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孔雀石绿ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被孔雀石绿抗原,样品残留的孔雀石绿和微孔条上预包被的抗原共同竞争抗孔雀石绿抗体,加入酶标二抗后,经TB底物显色,样品吸光度值与其残留物孔雀石绿呈负相关,与标准出线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中孔雀石绿的含量。
一、产品规格参数:
名称:孔雀石绿ELISA检测试剂盒
规格:48T/96T
检测方法:ELISA方法
检测波长:450/630nm
品牌:臻科生物
适用范围:仅供科研
检测样本种类:肌肉和肝脏组织、尿样、血清、饲料、动物组织、水产、蜂蜜、牛奶等。
贮藏:试剂盒于2-8℃保存,避免冷冻。
保质期:该产品有效期为1年,生产日期见包装盒。
二、检测步骤:
测定前应须知:
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20一25℃)。
2、使用之后立即将所有试剂放回28℃。
3、在LISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是LISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。
具体操作:
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板,将不用的微孔放入白封袋,保存于28℃。
3、洗涤作液在使用前也需回温。
4、编号:将样品和标准品对应微孔按序编号,每个样品和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样品孔所在的位置。
5、加标准品/样品:加标准品/样品5041/孔到对应的微孔中,然后加入抗试剂5041/孔,轻轻振荡混,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30mn。
6、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤工作液250μ1/孔,充分洗涤45次,每次间隔10s,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
7、加酶标物:加入酶标物100μ1/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min,取出重复洗板步骤6。
8、显色:加入底物液A液50μ1/孔,再加底物液B液50μ1/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15~20min。
9、测定:加入终止液50μ1/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450m处(建议用双波长450/630m检测,请在5min内读完数据),测定每孔0D值。(若无酶标仪,则不加终止液用日测法可进行判定)。
三、注意事项:
1、室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温(25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、混合要均匀,洗板要*,在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性。
4、在所有孵育过程中,用盖板膜封住微孔板,避免光线照射。
5、不要使用过了有效期的试剂盒,不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位(A450nm< 0.5 )时,表示试剂可能变质。
7、反应终止液有腐蚀性,避免接触皮肤。